Journal of Research & Applied Medicine

Las proteasas virales desempeñan un papel crucial durante el ciclo replicativo de diversos virus, lo que las convierte en blancos clave para el diseño de fármacos antivirales.
En este trabajo, describimos el desarrollo y la optimización de un ensayo in vitro para medir la actividad enzimática de la proteasa del virus chikungunya.
Para este ensayo, fue preciso disponer de la proteasa viral recombinante y de un sustrato sintético que imita uno de los sitios de corte naturales.
La expresión de ambas proteínas se realizó utilizando la cepa Rosetta de Escherichia coli, la cual está optimizada para mejorar la expresión de proteínas que contienen codones raros. La purificación se llevó a cabo mediante cromatografía de afinidad y permitió obtener ambas proteínas en forma pura y con alto rendimiento.
Los experimentos de validación mostraron que el ensayo de actividad enzimática es robusto, cuantitativo y nos permite seguir la actividad enzimática en el tiempo.
Nuestros resultados destacan el potencial de este método como herramienta para la caracterización de nuevos compuestos antivirales contra el virus chikungunya, y pueden servir en el desarrollo de ensayos para estudiar otras proteasas virales.

Viral proteases play a crucial role during the replication cycle of various viruses, making them key targets for antiviral drug design. In this work, we describe the development and optimization of an in vitro assay to measure the enzymatic activity of the chikungunya virus protease. For this assay, the recombinant viral protease and a synthetic substrate that mimics one of the natural cleavage sites were required. Expression of both proteins was performed using the Rosetta strain of Escherichia coli. coli, which is optimized to improve the expression of proteins containing rare codons. Purification was carried out by affinity chromatography and allowed obtaining both proteins in pure form and with high yield.
Validation experiments showed that the enzyme activity assay is robust, quantitative and allows us to follow enzyme activity over time.
Our results highlight the potential of this method as a tool for the characterization of new antiviral compounds against the chikungunya virus, and may be useful in the development of assays to study other viral proteases.

La Inflamación Crónica por disbiosis produce un desequilibrio de la respuesta del sistema nervioso autónomo (SNA) que implica menor adaptación a esta condición, afectando la calidad de vida de pacientes con enfermedades crónicas.

Chronic inflammation due to dysbiosis produces an imbalance in the response of the autonomic nervous system (ANS) that implies less adaptation to this condition, affecting the quality of life of patients with chronic diseases.